中和抗体是由B淋巴细胞分泌的可溶性蛋白,能够特异性识别病原体(如病毒、细菌)表面抗原,通过阻断其与宿主细胞受体的结合,阻止病原体入侵和复制,是评估疫苗效果和免疫应答的核心指标。常用的中和抗体检测方法大致可归为三种:真病毒中和实验、Elisa中和实验、假病毒中和实验(Pseudovirion-BasedNeutralizationAssay ,PBNA)。
真病毒中和实验:直接使用活病毒,完全模拟自然感染过程来检测中和抗体阻断病毒入侵宿主细胞的能力,但由于真病毒具有传染性和致病性,对实验室等级要求高(高致病性病毒需在BSL-3实验室操作)。
Elisa中和实验:具有无需细胞培养,检测速度快,安全性高等特点,但可能漏检非结合型中和抗体,灵敏度不足,导致容易出现假阳性或假阴性的错误结果。
PBNA:假病毒无自主复制能力,生物安全性较高,可在BSL-2实验室操作;可实现高通量与自动化——基于荧光素酶(Luc)或绿色荧光蛋白(GFP等)报告基因,支持96/384孔板检测,结果通过化学发光仪或Celigo自动读取;但与真病毒相比仍然具有一定的差异性。
指标 |
真病毒中和实验 |
Elisa中和实验 |
假病毒中和实验 |
生物安全要求 |
BSL-3(高危病毒) |
BSL-1 |
BSL-2 |
检测周期 |
5-7天 |
1-2小时 |
1-2天 |
通量 |
低 |
中 |
高 |
功能性评估 |
完整感染周期 |
仅抗原结合 |
仅入侵阶段 |
灵敏度 |
高(金标准) |
中低 |
高(接近真病毒) |
鉴于世界卫生组织(WHO)疫苗生产和控制指南的建议,使用PBNA来评估针对人类乳头瘤病毒(HPV)、狂犬病毒(RV)、肠道病毒71型(EV71)、人类免疫缺陷病毒(HIV)、中东呼吸综合征(MERS-CoV)、埃博拉病毒(EBOV)、等疫苗的有效性。
假病毒(Pseudoviruses)是一种具有单轮感染能力的重组病毒颗粒,对于无包膜病毒通常利用其自身结构蛋白制备假病毒;对于包膜病毒,一般常用水疱口炎病毒(VSV)、人类免疫缺陷病毒(HIV)等包装体系制备假病毒。
劲帆医药根据《基于假病毒的中和抗体检测法指导原则》对中和抗体类假病毒进行制备及分析方法开发,并建立了完整的制备与检测体系,可承接假病毒中和抗体检测服务,助力疫苗及流行病学研究。
以慢病毒为例的假病毒的生产及中和抗体检测示意图(图片来源:Fantoni,Tobia et al, Journal of visualized experiments.,2023)
货号 |
类别 |
产品名称 |
装载基因 |
滴度 (TCID50/mL) |
规格 |
周期 |
推荐用途 |
PSNAb-0010 |
RV-水疱性口炎病毒 假病毒 |
PS-Rabies virus-VSV-GFP/mCherry |
GFP、mCherry |
1.00E+7 |
100 μL/支 |
18-25 |
受体药物筛选、中和抗体活性检测及疫苗效果评价 |
PSNAb-0011 |
RV-慢病毒 假病毒 |
PS-Rabies virus-LV-GFP/mCherry/Luc |
GFP、mCherry、Luciferase |
100 μL/支 |
7-15 |
||
PSNAb-0012 |
MERS-水疱性口炎病毒 假病毒 |
PS-MERS-VSV-GFP/mCherry |
GFP、mCherry |
100 μL/支 |
18-25 |
||
PSNAb-0013 |
MERS-慢病毒 假病毒 |
PS-MERS-LV-GFP/mCherry/Luc |
GFP、mCherry、Luciferase |
100 μL/支 |
7-15 |
||
PSNAb-0014 |
Influenza-水疱性口炎病毒 假病毒 |
PS-Influenza-H1N1-VSV-GFP/mCherry |
GFP、mCherry |
100 μL/支 |
18-25 |
||
PSNAb-0015 |
PS-Influenza-H3N2-VSV-GFP/mCherry |
||||||
PSNAb-0016 |
PS-Influenza-H5N1-VSV-GFP/mCherry |
||||||
PSNAb-0017 |
PS-Influenza-H7N9-VSV-GFP/mCherry |
||||||
PSNAb-0018 |
Influenza-慢病毒 假病毒 |
PS-Influenza-H1N1-LV-GFP/mCherry/Luc |
GFP、mCherry、Luciferase |
100 μL/支 |
7-15 |
||
PSNAb-0019 |
PS-Influenza-H3N2-LV-GFP/mCherry/Luc |
||||||
PSNAb-0020 |
PS-Influenza-H5N1-LV-GFP/mCherry/Luc |
||||||
PSNAb-0021 |
PS-Influenza-H7N9-LV-GFP/mCherry/Luc |
||||||
PSNAb-0022 |
EBOV-水疱性口炎病毒 假病毒 |
PS-EBOV-VSV-GFP/mCherry |
GFP、mCherry |
100 μL/支 |
18-25 |
||
PSNAb-0023 |
EBOV-慢病毒 假病毒 |
PS-EBOV-LV-GFP/mCherry/Luc |
GFP、mCherry、Luciferase |
100 μL/支 |
7-15 |
* 我们还可提供原始株、Omicron株等SARS-CoV-2假病毒载体(Pseudovirus VSV/LV-S)现货;可定制不同病毒株和报告系统,与真病毒结果相关性高(>90%);可根据客户要求定制其他规格。
携带报告基因的AAV病毒:Luciferase/EGFP/mCherry;AAV空壳病毒 |
||||
AAV1 |
AAV1/2 |
AAV2 |
AAV2-7m8 |
AAV oligo001 |
AAV5 |
AAV6 |
AAV6m |
AAV6.2 |
AAV7 |
AAV8 |
AAV9 |
rAAV2-retro |
AAV-PHP.eB |
AAV-B10 |
AAV-PHP.S |
AAV-PAN |
AAV-DJ |
AAV-ShH10 |
AAV-ShH10(Y445F) |
AAV-Rh10 |
AAV-Anc80L65 |
AAV-BR1 |
AAV-BI30 |
AAV-SCH9 |
AAV MaCPNS1 |
AAV MaCPNS2 |
mac |
AAV DSS |
...... |
我司可提供用于中和抗体和总抗体检测的AAV产品,更多其他血清型病毒生产请咨询 |
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